关键词:
miR-200a-3p
程序性细胞死亡4
结直肠癌
诊断
预后
摘要:
目的:阐明miR-200a-3p及下游靶基因程序性细胞死亡4(programmed cell death 4,PDCD4)在结直肠癌(colorectal cancer,CRC)诊断及预后的潜在价值。方法:从2017年1月至2019年9月在长沙市第一医院接受根治性切除术或姑息性切除术的CRC患者中收集包含120对CRC组织和相应的癌旁正常组织的队列。另1个队列包括50例诊断为CRC的患者;2019年1月至2020年1月从这些患者手术前后收集术前和术后血清样本。RT-qPCR检测CRC组织和细胞系中miR-200a-3p的表达。将靶向miR-200a-3p(si-miR-200a-3p)和siRNAs阴性对照(si-NC),以及miR-200a-3p过表达(miR-200a-3p-OE)和PDCD4过表达(PDCD4)质粒转染CRC细胞。通过CCK-8测定、集落形成和Transwell细胞侵袭测定来确定miR-200a-3p对CRC细胞生长的影响。雌性BALB/c裸鼠随机分为3组:载体组(Vector组)、miR-200a-3p过表达组(miR-200a-3p-OE组)和miR-200a-3p过表达+PDCD4过表达组(miR-200a-3p-OE+PDCD4组)。构建小鼠远处转移模型,监测肺转移的荧光强度,计数肺转移结节的数量。结果:miR-200a-3p在CRC组织和细胞系中上调。miR-200a-3p高表达与肿瘤大小、肿瘤转移和TNM分期显著相关。miR-200a-3p表达可以作为总生存率(overall survival,OS)(HR=2.077,95%CI=1.079~3.998,P=0.029)和无病生存率(disease free survival,DFS)(HR=2.927,95%CI=1.179~7.270,P=0.021)的独立预后生物标志物。功能研究发现miR-200a-3p结合PDCD4的3'-UTR区,并降低PDCD4在CRC细胞中的表达。PDCD4过表达抑制miR-200a-3p过表达对CRC细胞增殖、集落形成、迁移和侵袭的促进作用。与体外结果一致,在转移的小鼠尾静脉注射模型中,miR-200a-3p-OE+PDCD4组SW480细胞的肺定植、肺转移灶较miR-200a-3p-OE组明显减少(P<0.05)。结论:miR-200a-3p在CRC细胞、组织和血清中表达显著增加,并可以作为诊断和预后的生物标志物。miR-200a-3p过表达通过抑制PDCD4表达促进CRC进展。