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白血病自体骨髓移植的体外净化

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白血病．淋巴瘤 2001年第3期10卷 185-187页

作者：黎金庆莫东华唐超生桂林医学院附属医院广西桂林541001

自体骨髓移植治疗白血病的缺点是复发率高,复发主要是回输的自体骨髓中含有残留的微量白血病细胞.在回输前进行骨髓净化具有降低复发率的作用.对自体骨髓在回输前进行体外净化是当前自体骨髓移植研究的主要课题之一.现就近年来骨髓净化... 详细信息

自体骨髓移植治疗白血病的缺点是复发率高,复发主要是回输的自体骨髓中含有残留的微量白血病细胞.在回输前进行骨髓净化具有降低复发率的作用.对自体骨髓在回输前进行体外净化是当前自体骨髓移植研究的主要课题之一.现就近年来骨髓净化的研究综述如下.

关键词：白血病体外净化反义核苷酸血癌自体骨髓移植造血重建

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c-myc反义核苷酸在治疗血液系统恶性肿瘤中的应用进展

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福建医科大学学报 2000年第1期34卷 83-85页

作者：刘庭波福建医科大学附属协和医院福建省血液病研究所福州350001

反义核苷酸用于治疗恶性肿瘤是近十年来基因治疗的热点,反义核苷酸应用的基础在于反义核苷酸已从原来天然的形态经人工修饰加工,成为有实用价值的寡聚核苷酸,其中硫代磷酸寡核苷酸(PS-ODN)和甲基磷酸酯寡聚核苷酸(MP-ODN)是两种研究最多... 详细信息

反义核苷酸用于治疗恶性肿瘤是近十年来基因治疗的热点,反义核苷酸应用的基础在于反义核苷酸已从原来天然的形态经人工修饰加工,成为有实用价值的寡聚核苷酸,其中硫代磷酸寡核苷酸(PS-ODN)和甲基磷酸酯寡聚核苷酸(MP-ODN)是两种研究最多,并已开始用于临床的ODN.成为治疗血液系统恶性肿瘤方面颇有应用前景的手段.现就c-myc反义核苷酸在血液系统恶性肿瘤方面的应用作一综述.

关键词：核苷酸类血液肿瘤基因治疗反义核苷酸

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PIN1反义基因转染抑制人骨肉瘤细胞的增殖(英文)

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Oncology and Translational Medicine 2006年第4期 308+294-297页

作者：熊文化陈安民郭风劲武汉华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科武汉华中科技大学同济医学院附属同济医院骨科 430030

目的观察以pIRES2-EGFP质粒为载体的PIN1反义基因转染对人骨肉瘤细胞增殖的抑制作用。方法用不同量(0、20、50、100、200、250μL)的以pIRES2-EGFP质粒为载体包装的反义PIN1基因转染人骨肉瘤细胞系MG-63细胞,收集转染前后的培养细胞和... 详细信息

目的观察以pIRES2-EGFP质粒为载体的PIN1反义基因转染对人骨肉瘤细胞增殖的抑制作用。方法用不同量(0、20、50、100、200、250μL)的以pIRES2-EGFP质粒为载体包装的反义PIN1基因转染人骨肉瘤细胞系MG-63细胞,收集转染前后的培养细胞和上清液,用MTT法观测转染前后细胞生长曲线;用流式细胞仪观测细胞生长周期变化和细胞凋亡情况;用免疫印迹法(Western-blot)检测Pinl蛋白的表达变化;用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测PIN1mRNA表达变化。结果MTT法和流式细胞仪显示反义PIN1基因转染能抑制细胞生长,促进其凋亡;Western-Blot结果表明转染反义Pin1基因的量越多,其灰度越低,测得空白对照组及不同量(0、20、50、100、200、250μL)的转染基因组其相应的吸光度比值分别为0．854±0．136、0．866±0．138、0．732±0．154、0．611±0．121、0．547±0．109、0．398±0．113、0．320±0．151,差异有显著性(P反义Pin1基因可封闭Pin1mRNA,使已转染反义Pin1基因的MG-63细胞表达的Pin1蛋白减少,从而抑制人骨肉瘤细胞MG- 63增殖。

关键词：反义核苷酸多肽脯氨酰基异构酶基因转染骨肉瘤

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反义阻断肿瘤坏死因子α在脑缺血中的早期表达

反义阻断肿瘤坏死因子α在脑缺血中的早期表达

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作者：王爽浙江大学

学位级别：硕士

[背景和目的]炎症反应参与缺血性脑损伤的观点已被人们所接受。前炎症因子中的肿瘤坏死因子a(TNFa)和白介素1β(1L-1β)在脑缺血后迅速上调，协同作用介导炎症反应。研究表明TNFa在脑缺血中作用复杂，具有缺血保护和缺血损伤双重作用。... 详细信息

[背景和目的]炎症反应参与缺血性脑损伤的观点已被人们所接受。前炎症因子中的肿瘤坏死因子a(TNFa)和白介素1β(1L-1β)在脑缺血后迅速上调，协同作用介导炎症反应。研究表明TNFa在脑缺血中作用复杂，具有缺血保护和缺血损伤双重作用。它在缺血后引起组织炎症损伤，同时也诱导组织的抗氧化损伤，启动组织修复。TNFa的作用目前还有争议。本研究使用反义核苷酸(ODN)TJU-2755直接阻断脑组织在缺血早期产生TNFa，观察对SD大鼠脑缺血的影响。 [实验方法]缺血前36h开始每12h给大鼠脑室内注射20ug的ODN或脑脊液。第3次注射后用线栓法制作MCAO模型。大鼠缺血70min后行再灌注。在缺血后12h进行第四次注射。缺血后一天评价大鼠的行为感觉运动功能并用TTC染色法计算大鼠梗死体积。 [结果和结论]用反义核苷酸TJU-2755处理的大鼠与用对照药物TJU2755ss或脑脊液的大鼠相比，梗死体积缩小20％，神经功能有改善，结果有显著性差异。本研究显示反义核苷酸TJU-2755在大鼠脑组织中能选择性的抑制TNFa表达，并且抑制TNFa的表达在脑缺血早期具有保护作用。本研究为TNFa参与缺血性脑损伤提供了新的证据，并且表明在脑缺血的早期(24h内)，TNFa的首要作用是促进炎症反应导致组织损伤。

关键词：肿瘤坏死因子脑缺血反义核苷酸

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转染血管紧张素受体Ⅱ(AT_l)反义核苷酸对血管平滑肌细胞增殖的影响

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高血压杂志 2000年第3期8卷 256-258页

作者：杨永健祝善俊祝之明胡厚祥丁钢钟键第三军医大学新桥医院心内科第三军医大学大坪医院高血压中心重庆400037

目的 :评价转染 ATl 反义核菩酸 (ATl A)对血管平滑肌细胞(VSMCs)血管紧张 (Ang )受体亚型 m RNA表达、蛋白激酶 C(PKC)、丝裂素活化蛋白激酶 P38(P38MAPK)蛋白表达 ,及蛋白核酸合成的作用。方法 :RT- PCR克隆 ATl c DNA序列 (476 bp... 详细信息

目的 :评价转染 ATl 反义核菩酸 (ATl A)对血管平滑肌细胞(VSMCs)血管紧张 (Ang )受体亚型 m RNA表达、蛋白激酶 C(PKC)、丝裂素活化蛋白激酶 P38(P38MAPK)蛋白表达 ,及蛋白核酸合成的作用。方法 :RT- PCR克隆 ATl c DNA序列 (476 bp) ,将克隆的 ATlc DNA反向插入 Pc DNA3.1 ,构建一完整的含 ATl A的质粒(PATl A) ,测序鉴定。转染培养的大鼠 VSMCs,RT- PCR检测转染 VSMCs AT1 m RNA表达。Ang (1 0 - 7mol/ L)剌激 2 4h后 ,比较转染与非转染的 VSMCs AT1 与 AT2 m RNA表达(RT- PCR)、P38MAPK和 PKC蛋白表达 (免疫印迹 ,westernblot)、蛋白核酸合成 (3H- L eucine及 3H- Thym idine掺入 )。结果 :成功构建 PATl A。RT- PCR显示转染 VSMCs ATlm RNA表达量显著减少 ,与对照 VSMC相比差异显著 (P0 .0 5 )。结论 :经 ATl A封闭后 ,能显著抑制 VSMC ATl m RNA表达 ,同时上调 AT2 m RNA。单纯封闭 ATlm RNA并不能有效阻断Ang 介导的 VSMCs蛋白核酸合成及 VSMCs生长相关的信号转导 ,

关键词：血管紧张素Ⅱ 受体反义核苷酸增殖高血压

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雄激素受体反义RNA对前列腺癌细胞雄激素受体表达的抑制作用研究

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第三军医大学学报 2003年第6期25卷 501-504页

作者：江军王洛夫方玉华靳风烁靳文生李彦锋第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所泌尿外科重庆400042

目的　观测雄激素受体 (AR)反义RNA逆转录病毒表达载体在前列腺癌细胞中的表达及其对AR表达的影响。方法　将AR反义RNA逆转录病毒表达载体导入前列腺癌细胞株LNCaP ,PCR检测AR目的片段在重组LNCaP细胞基因组中的存在 ,RT PCR检测AR反义... 详细信息

目的　观测雄激素受体 (AR)反义RNA逆转录病毒表达载体在前列腺癌细胞中的表达及其对AR表达的影响。方法　将AR反义RNA逆转录病毒表达载体导入前列腺癌细胞株LNCaP ,PCR检测AR目的片段在重组LNCaP细胞基因组中的存在 ,RT PCR检测AR反义RNA表达和ARmRNA水平 ,Westernblot检测AR蛋白表达水平。结果　PCR在LNCaPas AR基因组DNA中扩增出了AR目的片段 ,表明AR目的片段整合到了细胞基因组。RT PCR证实LNCaPas AR有AR反义RNA表达 ,且其ARmRNA水平较LNCaP和空载体转染的LNCaPNeo显著下调 (P <0 .0 5 ) ,Westernblot证实LNCaPas AR细胞AR蛋白含量显著下降 (P <0 .0 5 )。

关键词：反义核苷酸雄激素受体前列腺癌

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P物质受体参与大鼠纹状体边缘区学习记忆的研究

P物质受体参与大鼠纹状体边缘区学习记忆的研究

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作者：刘雪梅华南师范大学

学位级别：硕士

P物质(substance P,SP)是1931年最早发现的一种神经肽,广泛存在于中枢神经系统与外周神经中,不仅起着神经递质与神经调质的作用,而且还是调节机体免疫和内分泌的重要因子。SP及其NK1受体参与了重要的生理功能,如免疫调节、痛觉传递、呼... 详细信息

P物质(substance P,SP)是1931年最早发现的一种神经肽,广泛存在于中枢神经系统与外周神经中,不仅起着神经递质与神经调质的作用,而且还是调节机体免疫和内分泌的重要因子。SP及其NK1受体参与了重要的生理功能,如免疫调节、痛觉传递、呼吸、消化、攻击行为、情绪反应以及脑的高级功能学习与记忆。纹状体边缘区是1988年舒斯云教授在大鼠脑内新纹状体尾内侧边缘、包绕苍白球外侧的位置上,发现的一条密集排列的梭形细胞带组成的新月形区域,该区富含多种神经递质,如SP、脑啡肽、胆囊收缩素、强啡肽B、生长抑素、神经降压肽等,还富含与学习记忆有关的神经递质受体,如5-羟色胺受体、NMDA受体、GABA受体等。舒斯云教授研究小组在以后的20年内,通过行为学研究、递质受体研究、即刻早期基因研究、电生理研究和功能磁共振研究等一系列研究方法,证明了边缘区与脑的学习记忆功能相关。　　本实验用了免疫组织化学、免疫荧光细胞化学以及原位杂交方法,观察了大鼠脑内SP、NK1受体以及NK1R mRNA在纹状体的分布,尤其是在边缘区的分布,我们发现SP、NK1受体以及NK1 RmRNA等在纹状体边缘区神经元胞体、树突、纤维终末等的含量要明显高于纹状体的其他部位;在边缘区中,SP、NK1受体以及NK1R mRNA阳性细胞呈梭形,从细胞的两极发出两个带棘的初级树突,背腹方向走行很长的距离,多层密集排列的细胞组成新月形的区域;SP、NK1受体以及NK1R mRNA阳性神经元在纹状体的分布大体一致,在边缘区较密集,细胞背腹走向;尾壳核有少量点散状分布的多极神经元;在苍白球中只有极少数大的多极神经元。提示可能边缘区的NK1受体主要由边缘区的NK1RmRNA合成,接受边缘区中SP纤维的传入,调节边缘区神经元的活动。　　为了进一步论证NK1受体介导了P物质参与的学习记忆功能,我们采用了免疫荧光细胞化学结合Y-迷宫行为学测试,以大家公认的与学习记忆有关的脑区-海马区为对照,首先观察了NK1受体阳性细胞在边缘区和海马(DG、CA1、CA3)的分布特征,并且采用了立体定位手术结合Y-迷宫行为学测试,观察了5组大鼠(双侧边缘区注射组、单侧边缘区注射组、双侧海马注射组、单侧海马注射组、对照组生理盐水注射组)在边缘区或海马注射NK1R mRNA的反义寡核苷酸前后,大鼠在Y-迷宫行为学测试中所需要的电击次数的变化,衡量大鼠的学习记忆能力。实验证实了无论是单侧边缘区(P<0.05)还是双侧边缘区(P<0.01.)NK1R mRNA被封闭之后,大鼠所需要的电击次数显著增加,也即是大鼠的学习记忆能力是显著下降的,并且在双侧海马区或单侧海马区注射组中也发现了类似的结果,不同的是边缘区比海马的下降趋势更明显,我们可以推测边缘区NK1受体介导了P物质参与的学习记忆功能并且边缘区与海马在大鼠NK1RmRNA被封闭后的学习记忆能力上的作用是相似的,边缘区可能参与了更复杂的学习记忆过程。

关键词：纹状体边缘区学习记忆 P物质 NK1受体免疫组织化学反义核苷酸

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反义核苷酸技术治疗肿瘤近况

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现代中西医结合杂志 2000年第22期9卷 2205-2206页

作者：陈杰魏萍第三军医大学新桥医院肿瘤科重庆市400037 重庆市卫生防疫站 400000

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基因功能的研究方法

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生物工程学报 2002年第1期18卷 117-120页

作者：纪宗玲刘继中陈苏民第四军医大学生物化学教研室西安710032 第四军医大学全军骨科研究所西安710032

人类基因组计划的顺利进行使基因功能研究成为生命科学领域中的重大课题 ,基因转导、反义技术、转基因和基因剔除、染色体转导、RNA干涉等是目前研究基因功能的主要方法 ,新的技术不断涌现。

关键词：基因功能研究方法基因转导反义核苷酸转基因基因剔除染色体转导 RNA干涉

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靶向Bcl-xl mRNA低自由能区域的反义寡核苷酸对人乳腺癌细胞系MCF-7体外增殖和凋亡的影响

靶向Bcl-xl mRNA低自由能区域的反义寡核苷酸对人乳腺癌细胞系MCF...

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作者：罗益民兰州大学

学位级别：硕士

目的；观察结合于Bcl-xlmRNA上低自由能区域的反义寡核苷酸对Bcl-xl基因的抑制效应，以及对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞体外增殖和凋亡的影响\n 方法；基于最小自由能算法分析出Bcl-xlmRNA上的低结合自由能区域，并针对这一区域合成反... 详细信息

目的；观察结合于Bcl-xlmRNA上低自由能区域的反义寡核苷酸对Bcl-xl基因的抑制效应，以及对人乳腺癌细胞系MCF-7细胞体外增殖和凋亡的影响\n 方法；基于最小自由能算法分析出Bcl-xlmRNA上的低结合自由能区域，并针对这一区域合成反义核酸As587；转染高表达Bcl-xl的人乳腺癌细胞系MCF-7；倒置显微镜及透射电子显微镜下观察细胞形态学改变；MTT法测定细胞增殖抑制率，RT-PCR检测Bcl-xlmRNA水平；免疫细胞化学方法检测Bcl-xl蛋白表达;流式细胞术检测细胞周期及凋亡发生率。\n 结果；***-7细胞增殖受抑，且抑制效应与寡核苷酸浓度、作用时间呈量效及时效关系\n ***-xlmRNA及蛋白表达水平下降，细胞出现凋亡\n 结论；***587能抑制Bcl-xl基因的表达，在体外能抑制乳腺癌细胞增殖\n 2.

关键词：乳腺癌自由能反义核苷酸 Bcl-xl MCF-7 细胞增殖细胞凋亡

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